Mi a PCR terméktisztítás célja?
Mi a PCR terméktisztítás célja?

Videó: Mi a PCR terméktisztítás célja?

Videó: Mi a PCR terméktisztítás célja?
Videó: МАЛЬДИВЫ, которые в самое сердце. Большой выпуск. 4K 2024, Lehet
Anonim

Tisztítás DNS-t a PCR A reakció jellemzően a későbbi felhasználáshoz szükséges, és megkönnyíti az enzimek, nukleotidok, primerek és pufferkomponensek eltávolítását. Ezt hagyományosan szerves extrakciós módszerekkel, például fenolos kloroformos extrakcióval, majd etanolos kicsapással végezték.

Kérdés továbbá, hogy miért van szükség a PCR termékek tisztítására?

Neked kell a PCR termékek tisztítása megszabadulni a fel nem használt primerektől, nukleotidoktól és enzimektől a ligálás sikerének optimalizálása érdekében, amely fenntartja és szekvenálja a termék nak,-nek PCR . Nak nek megtisztítani az PCR termékek méretkizárásos kromatográfiát alkalmazunk.

Ezenkívül mit tegyek a PCR után? A visszanyerés maximalizálása érdekében öblítse le kétszer a retentát poharat 10-20 µL TE-vel vagy vízzel. A végső PCR A reakció legfeljebb mikrogramm amplifikált DNS-t tartalmazhat, amely számos molekuláris biológiai alkalmazáshoz felhasználható. Ezek az alkalmazások többé-kevésbé érzékenyek lehetnek a maradék összetevőkre PCR reakciókeverék.

Felmerülhet az a kérdés is, hogyan tisztítod a PCR-termékeket?

A használt klasszikus módszerek tiszta fel PCR termékek a szekvenálás előtt gélelektroforézis, etanolos kicsapás és oszlopkromatográfia. Noha ezek a módszerek meglehetősen hatékonyak, gyorsan nehézkessé válhatnak több minta párhuzamos feldolgozásakor, és különböző mértékű mintaveszteséget mutatnak.

Miért kell a DNS-t megtisztítani?

Mi tiszta fel DNS vizes oldatokból a puffersók, enzimek vagy egyéb anyagok eltávolítására, amelyek hatással lehetnek a későbbi alkalmazásokra. Ilyen például a PCR reakció tiszta fel, tiszta fel a restrikciós emésztések után és tiszta genomi vagy plazmid felfelé DNS sejtfehérjékkel/törmelékkel szennyezett.

Ajánlott: