Mennyibe kerül egy kötés átalakítása?
Mennyibe kerül egy kötés átalakítása?

Videó: Mennyibe kerül egy kötés átalakítása?

Videó: Mennyibe kerül egy kötés átalakítása?
Videó: Mennyibe kerül egy lakberendező 2024, December
Anonim

átalakítás . Adjon hozzá 1-5 µl-t lekötés keveréket kompetens sejtekhez átalakítás . Kiterjedt lekötés a PEG-el a bemenet visszaesését okozza átalakítás hatékonyság (gyors Lekötés Készlet). Nagyméretű (>10 000 bp) konstrukciók esetén javasolt az elektroporáció.

Ebből mennyi ligációs termékre van szükségem az átalakuláshoz?

átalakítás . Adjunk hozzá 1-5 µl-t lekötés keveréket kompetens sejtekhez átalakítás . Kiterjedt lekötés a PEG-el a bemenet visszaesését okozza átalakítás hatékonyság (gyors Lekötés Készlet). Nagyméretű (>10 000 bp) konstrukciók esetén javasolt az elektroporáció.

Ezt követően a kérdés az, hogy mi az a ligálás és átalakulás? Egy tipikus klónozási kísérlet során a kutatók először egy DNS-darabot, például egy gént szúrnak be egy kör alakú DNS-darabba, amelyet plazmidnak neveznek. Ez a lépés restrikciós enzimeket és DNS-ligázt használ, és a lekötés . Után lekötés , a következő lépés a DNS baktériumokba való átvitele az ún átalakítás.

Ezt követően az is felmerülhet, hogy mennyi DNS-re van szükség a ligáláshoz?

A vektor + inszert teljes koncentrációjának 1-10 Μg/ml között kell lennie a hatékony hatás érdekében lekötés . Vektor: 1:1 és 1:10 közötti mólarány javasolt (1:3 a jellemző). Ha nem biztos benne DNS koncentrációknál végezzen többszörös lekötést változó arányokkal.

Mennyi ideig tárolható a kötési reakció?

Lekötések lehet szobahőmérsékleten vagy hűvösebb (gondoljunk 12-16°C-ra) egy éjszakán át vagy akár néhány napig, ha te nagyon elfoglaltak. tudsz is lekötést tárolni hűtőbe tesszük, és később vegyük ki, hogy szobahőmérsékleten folytassuk a ligálást hosszú szükség szerint.

Ajánlott: