Hogyan számítják ki a DNS-koncentrációt spektrofotométerrel?
Hogyan számítják ki a DNS-koncentrációt spektrofotométerrel?

Videó: Hogyan számítják ki a DNS-koncentrációt spektrofotométerrel?

Videó: Hogyan számítják ki a DNS-koncentrációt spektrofotométerrel?
Videó: ESSENCE VAULT VS PERFUME PARLOUR CLONE FRAGRANCE BATTLE 2024, Március
Anonim

DNS koncentráció van által becsült az abszorbancia mérése 260 nm-en, az A beállítása260 zavarosság mérés ( által mérve abszorbancia 320 nm-en), megszorozva által a hígítási tényező, és segítségével az a kapcsolat, amelyet egy A260 1,0 = 50 µg/ml tiszta dsDNS.

Az emberek azt is kérdezik, hogyan találja meg a DNS koncentrációját és tisztaságát?

Hogy értékelje DNS tisztaság , mérje meg az abszorbanciát 230 nm és 320 nm között az egyéb lehetséges szennyeződések kimutatásához. A leggyakrabban tisztasági számítás a 260 nm-en mért abszorbancia hányadosa osztva a 280 nm-nél mért értékkel. Jó minőségű DNS lesz egy A260/A280 aránya 1,7-2,0.

Hasonlóképpen, mi a jó DNS-koncentráció? A jó minőség DNS A mintán legyen A260/A280 az arány 1,7-2,0 és egy A260/A230 aránya nagyobb, mint 1,5, de mivel a különböző technikák érzékenysége ezekre a szennyeződésekre eltérő, ezeket az értékeket csak iránymutatónak kell tekinteni a minta tisztaságára vonatkozóan.

Ezzel kapcsolatban hogyan számítja ki a NanoDrop a DNS-koncentrációt?

Az abszorbancia értékét 260 nm-en megszorozod egy rögzített tényezővel (ez 50 DNS ), és megkapod a DNS koncentráció . Voálá. (Rendben, ez technikailag egy 10 mm vastag minta A260-asa, amelyet megszoroznak 50-zel; NanoDrop úgy fejezi ki az A260-at, mintha a minta 10 mm vastag lenne, mint egy standard küvettában).

Miért kellett spektrofotométert használnunk DNS-ünk számszerűsítéséhez?

A spektrofotométer az képes meghatározni a nukleinsavak átlagos koncentrációját DNS vagy RNS jelenléte keverékben, valamint azok tisztasága. Használata a Beer–Lambert törvény azt van az elnyelt fény mennyiségét az elnyelő molekula koncentrációjához lehet viszonyítani.

Ajánlott: